分子實(shí)驗(yàn)分子互作：EMSA凝膠遷移阻滯實(shí)驗(yàn)

一、技術(shù)簡(jiǎn)介

EMSA技術(shù)即凝膠遷移或電泳遷移率實(shí)驗(yàn)，用于研究DNA/RNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA/RNA結(jié)合序列相互作用的技術(shù)；

二、技術(shù)原理

將純化的蛋白或細(xì)胞粗提液與標(biāo)記的DNA或RNA探針一同孵育，在非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳中，DNA-蛋白或RNA-蛋白復(fù)合物的遷移率比未結(jié)合的探針慢，從而檢測(cè)到活化的與DNA或RNA結(jié)合的蛋白轉(zhuǎn)錄或調(diào)節(jié)因子。

三、應(yīng)用場(chǎng)景

1.基因表達(dá)調(diào)控研究：確定轉(zhuǎn)錄因子與DNA的結(jié)合位點(diǎn)和結(jié)合特性，研究基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制。

2.疾病機(jī)理研究：分析疾病相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控異常，探索疾病的發(fā)生發(fā)展機(jī)制。

3.藥物靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)：篩選和鑒定與疾病相關(guān)的DNA結(jié)合蛋白，為藥物研發(fā)提供靶點(diǎn)。

4.信號(hào)通路研究：研究信號(hào)通路中DNA結(jié)合蛋白的活性變化及其對(duì)下游基因的影響。

四、技術(shù)優(yōu)勢(shì)

1.實(shí)驗(yàn)操作相對(duì)簡(jiǎn)單，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求不苛刻。

2.可檢測(cè)多種核酸分子大小和結(jié)構(gòu)以及廣泛的蛋白大小范圍，能在單個(gè)反應(yīng)體系中檢測(cè)不同蛋白與不同核酸分子的結(jié)合情況。

3.生物素標(biāo)記探針穩(wěn)定、安全、準(zhǔn)確且親和力高。

五、樣本類型

新鮮細(xì)胞（貼壁細(xì)胞/懸浮細(xì)胞）、凍存細(xì)胞、凍存組織、細(xì)胞核蛋白樣本或純化的轉(zhuǎn)錄因子，部分實(shí)驗(yàn)亦可使用重組表達(dá)的蛋白。

六、樣本需求

細(xì)胞樣本：約1×10^7個(gè)（可以是1個(gè)10cm皿，或以懸浮細(xì)胞形式存儲(chǔ)于離心管中，或1個(gè)T75瓶）；

凍存組織：約400mg；

植物組織：約2g；細(xì)胞核蛋白、純化轉(zhuǎn)錄因子、重組表達(dá)蛋白等：每張膜至少提供50ul，濃度不低于0.5mg/ml。

七、樣本準(zhǔn)備&運(yùn)輸

活細(xì)胞樣本：距離較近的可以將養(yǎng)在皿/T75瓶/離心管內(nèi)的新鮮細(xì)胞樣本常溫快遞（最遲次日達(dá)）運(yùn)輸，本市內(nèi)可閃送或親自遞送，距離較遠(yuǎn)的，可-80℃凍存細(xì)胞干冰運(yùn)輸；

組織樣本&其他液體樣本：-80℃凍存干冰運(yùn)輸。

八、需提供的試劑

結(jié)合蛋白特異性抗體50ul以上，濃度大于0.5mg/ml。

九、實(shí)驗(yàn)周期

2-3周

十、其他

探針序列，如無探針序列，請(qǐng)?zhí)峁〥NA結(jié)合蛋白相關(guān)信息或相關(guān)文獻(xiàn)。