分子互作實(shí)驗(yàn)IP/CO-IP免疫共沉淀

一、技術(shù)簡(jiǎn)介

IP（免疫沉淀，Immunoprecipitation）和Co-IP（免疫共沉淀，Co-Immunoprecipitation）是研究蛋白質(zhì)功能及相互作用的核心技術(shù)，廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域。

二、技術(shù)原理

IP通過(guò)特異性抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合，利用抗體將靶標(biāo)蛋白（即抗原）分離出來(lái)，從而檢測(cè)某一種蛋白的表達(dá)情況；而CO-IP是在IP基礎(chǔ)上，驗(yàn)證蛋白質(zhì)間的相互作用。通過(guò)捕獲一個(gè)蛋白（誘餌蛋白），檢測(cè)與其結(jié)合的互作蛋白（靶蛋白），從而特異性富集所研究的目的蛋白，進(jìn)而研究復(fù)合物中與已知蛋白存在相互作用的蛋白。

三、應(yīng)用場(chǎng)景

1.IP：富集低豐度蛋白用于質(zhì)譜鑒定（IP-MS）、驗(yàn)證抗體特異性。

2.Co-IP：研究轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物、激酶-底物相互作用及驗(yàn)證已知互作或發(fā)現(xiàn)新互作伙伴（如信號(hào)通路復(fù)合物）。

四、技術(shù)優(yōu)勢(shì)

1.IP：具有高特異性，依賴抗體-抗原的專一性結(jié)合。

2.靈活性：支持物可選磁珠（操作簡(jiǎn)便、自動(dòng)化兼容）或瓊脂糖（高結(jié)合容量）。

3.Co-IP：體內(nèi)真實(shí)性：研究的是體內(nèi)自然狀態(tài)下的蛋白質(zhì)互作，可反應(yīng)比較真實(shí)的蛋白互作。

五、樣本類型

新鮮細(xì)胞（貼壁細(xì)胞/懸浮細(xì)胞）、凍存細(xì)胞、凍存組織、裂解液樣本。

六、樣本需求

細(xì)胞樣本：約5×10^6個(gè)（可以是2個(gè)6cm皿，或以懸浮細(xì)胞形式存儲(chǔ)于離心管中，或2個(gè)T25瓶）；

凍存組織：約40mg；裂解液樣本：蛋白濃度不低于2mg/mg，蛋白總量不低于3mg。

七、樣本準(zhǔn)備&運(yùn)輸

活細(xì)胞樣本：距離較近的可提供新鮮樣本，將培養(yǎng)在皿/T25瓶/離心管內(nèi)的新鮮細(xì)胞樣本常溫快遞（最遲次日達(dá)）運(yùn)輸，本市內(nèi)可閃送或親自遞送，距離較遠(yuǎn)的，可-80℃凍存細(xì)胞干冰運(yùn)輸；

組織樣本&裂解液樣本：-80℃凍存干冰運(yùn)輸。

八、需提供的試劑

檢測(cè)用IB抗體和IP抗體

九、實(shí)驗(yàn)周期

1-2周（不包含質(zhì)譜）

十、其他

后續(xù)檢測(cè)Western blot/蛋白質(zhì)譜